«РМЖ. Мать и дитя»
ISSN 2618-8430 (Print), 2686-7184 (Online)

Сравнительная эффективность влагалищного и ректального применения цитокинотерапии у беременных с дисплазией шейки матки



Импакт фактор - 0,458*
Журнал входит в Перечень рецензируемых научных изданий ВАК.

*Импакт фактор за 2017 г. по данным РИНЦ

РМЖ «Мать и дитя» №3 от 09.10.2019 стр. 173-176
Рубрика: Акушерство
Цель исследования: оценка эффективности влагалищного и ректального способа проведения цитокинотерапии препаратом Суперлимф у беременных с дисплазией шейки матки. Материал и методы: проспективное исследование 50 беременных с умеренной дисплазией шейки матки, из них 30 получали цитокинотерапию влагалищным путем, 20 — ректально. Оценен уровень вирусной нагрузки вирусом папилломы человека (ВПЧ) и экспрессии генов врожденного иммунитета (TNF-α, TLR-9, TLR-2, HBD-1) в эпителии цервикального канала и во влагалище до и через 20 дней лечения. Результаты исследования: в 100% случаев был обнаружен ВПЧ. Преобладали типы ВПЧ группы А9 у 83,3% пациенток основной группы и у 55% группы сравнения; ВПЧ 51 и 56 типов — у 10% и 35% пациенток, а группы А7 (18 тип) — у 5,6% и 10% беременных соответственно. Влагалищное введение препарата Суперлимф приводило к снижению вирусной нагрузки для ВПЧ группы А9 в 1,3 раза и ВПЧ группы А7 в 1,8 раза. Для вирусов 51 и 56 типов не было отмечено достоверных изменений. При ректальном применении препарата для ВПЧ группы А7 титр вирусной нагрузки снижался в 1,4 раза. Вне зависимости от пути введения препарата отмечено его модулирующее влияние на экспрессию факторов врожденного иммунитета. Экспрессия TLR-2 и TLR-9 возрастала в клетках эпителия влагалища, а уровень TNF-α и HBD-1 увеличивался как в цервикальном канале, так и во влагалище. Заключение: влагалищный путь введения препарата Суперлимф обладает более выраженным терапевтическим эффектом, проявляющимся в повышении экспрессии факторов врожденного иммунитета в эпителии половых путей и более значимом снижении вирусной нагрузки. Ключевые слова: дисплазия шейки матки, беременность, вирус папилломы человека, врожденный иммунитет, фактор некроза опухоли альфа, TLR-9, TLR-2, HDB-1, цитокинотерапия, Суперлимф.
Для цитирования: Боровкова Е.И., Залесская С.А., Степанянц И.В. Сравнительная эффективность влагалищного и ректального применения цитокинотерапии у беременных с дисплазией шейки матки // РМЖ. 2019. №3. С. 173-176
Введение Дисплазия шейки матки — это патологический процесс, в основе развития которого лежит длительное персистирование вируса папилломы человека (ВПЧ), приводящее к нарушению пролиферации клеток и развитию ядерной атипии [1, 2]. Среди пациенток молодого возраста распространенность вирусной инфекции крайне высока, однако возможна спонтанная элиминация вируса. Обладая слабой иммуногенностью, ВПЧ не вызывает развития стойкого пожизненного иммунитета. В связи с этим возможно повторное заражение ВПЧ или сосуществование нескольких типов вируса [3, 4]. Решающим аспектом в прогнозе исходов вирусной инфекции является состояние местного иммунитета слизистых. Во время беременности в связи с физиологическим иммунодефицитом вероятна активация вирусной инфекции и манифестирование связанных с ней заболеваний [5–7]. Дисплазия шейки матки диагностируется в 13 случаях на 10 000 беременностей. По современным рекомендациям тактика ведения таких пациенток активно-выжидательная [8, 9]. Это связано с доказанной низкой скоростью прогрессирования патологического процесса и высокой вероятностью его спонтанного регресса [10]. Риск прогрессирования тяжелой дисплазии до микроинвазивного рака во время беременности не превышает 1,1–3,6% [11]. Важным звеном защиты организма от внедрения вирусной инфекции является врожденный иммунитет [12]. Врожденная иммунная система распознает вирусы и бактерии через рецепторы распознавания образов (pattern recognition receptors — PRR), специфичных для молекулярных компонентов микроорганизмов [13]. Первым этапом взаимодействия вируса с клеткой является контакт с поверхностными Toll-подобными рецепторами (Toll like receptors — TLR). TLR представляют собой трансмембранные PRR, которые обнаруживаются как на поверхности, так и внутри клеток (в моноцитах, макрофагах, эпителиальных клетках и нейтрофилах, дендритных клетках). TLR распознают множество патоген-ассоциированных молекулярных фрагментов (Pathogen associated molecular patterns — PAMP), включая микробные компоненты клеточной стенки, белки и нуклеиновые кислоты. Передача сигналов TLR приводит к изменениям транскрипционных факторов, которые регулируют множество генов, в т. ч. кодирующих важные провоспалительные цитокины и интерферон [14, 15]. Ранее проведенные исследования показали, что использование терапии препаратом Суперлимф позволяет повысить экспрессию TLR и усилить противовирусную резистентность организма [15]. Однако представленные работы касались влагалищного применения лекарственных средств. Нас заинтересовало, можно ли оказать системное воздействие на организм и повысить напряженность факторов врожденного иммунитета не только во влагалищном биотопе. При ректальном введении лекарственных препаратов системное действие может быть оценено на основании изменений, выявленных в слизистых других локализаций, например в ротовой полости или во влагалище [15]. Целью нашего исследования явилась оценка эффективности влагалищного и ректального способа проведения цитокинотерапии у беременных с дисплазией шейки матки. Материал и методы Было проведено проспективное исследование, включившее 50 женщин с дисплазией шейки матки. В основную группу были включены 30 беременных, которым терапия проводилась интравагинально, в группу сравнения — 20 пациенток, которые вводили препарат ректально. С лечебной целью назначался препарат Суперлимф по 1 свече (25 ЕД) в течение 20 дней. Препарат Суперлимф представляет собой комплекс природных противомикробных пептидов и цитокинов с активностью фактора, угнетающего миграцию макрофагов, интерлейкина-1, интерлейкина-6, фактора некроза опухоли (tumor necrosis factor — TNF), трансформирующего фактора роста. Согласно инструкции препарат обладает иммуномодулирующим, противовирусным и противомикробным эффектом, стимулируя активность моноцитов и нейтрофилов. Критерии включения в исследование: Умеренная дисплазия шейки матки (по данным цитологического и гистологического исследований). Наличие ВПЧ группы высокого онкогенного риска. Отсутствие специфического и неспецифического вагинита. Физиологическое течение беременности. Отсутствие соматической и аутоиммунной патологии. Подписанное информированное согласие на участие в исследовании. Отсутствие аллергии к белкам свиного происхождения. 9 женщин (30%) основной группы были в I тримест­ре беременности, 11 (36,6%) — во II триместре, 10 (33,3%) — в III триместре. Срок беременности пациенток группы сравнения был 14–18 нед. (10 человек) и 28–33 нед. (10 человек). В объем обследования пациенток обеих групп входило цитологическое исследование соскобов с экзо- и эндоцервикса (метод жидкостной цитологии NovaPrep), качественное и количественное определение ВПЧ (метод DIGENE-test), исследование показателей врожденного иммунитета. Тесты проводились на этапе включения в исследование и через 20 дней после лечения препаратом Суперлимф. Изучение факторов врожденного иммунитета включало определение экспрессии генов TLR-9, TLR-2, HBD-1 (дефенсин) и TNF-α в эпителиальных клетках цервикального канала и многослойного плоского эпителия влагалища. Для забора материала были использованы цитощетки (тип D1) для эндоцервикса и стерильный гинекологический зонд (тип А) для влагалища. Зонды помещались в эпендорф со средой и замораживались при температуре -20 °С. Исследование проводилось на кафедре иммунологии медико-биологического факультета РНИМУ им. Н.И. Пирогова. После размораживания в каждую пробирку вносили по 450 мкл лизирующего раствора и 100 мкл суспензии клеток, пробы перемешивали на вортексе, трехкратно центрифугировали, отмывали раствором, подсушивали. В пробирки добавляли по 50 мкл РНК-буфера, выдерживали в термостате, вортексировали, центрифугировали и получали супернатант с очищенной РНК. Реакцию обратной транскрипции проводили в объеме 25 мкл. Реакционная смесь содержала 3 мкл РНК-матрицы, 1 мкл random («Синтол», Россия) и 9 мкл дважды дистиллированной H2O. Смесь инкубировали при температуре 75 °С в течение 5 мин, далее пробирки охлаждали до 4 °С. После добавляли 10 мкл смеси, состоящей из 10 х ОТ буфер 3 мкл, 100 ед. ревертазы M-MLV («Синтол», Россия). Смесь инкубировали в течение 1 ч при 37 °С. Инактивацию проводили при 92 °С в течение 10 мин. Полученную комплементарную ДНК (кДНК) хранили при -70 °С. Статистическая обработка результатов проводилась с использованием программного обеспечения Microsoft Excel 2016 и Statistica 6.1. Сравнение показателей до и после лечения проводилось с использованием критерия Вилкоксона. Результаты считались достоверными при уровне вероятности ошибки p
Литература
1. Azim H.A. Jr. Managing cancer during pregnancy. Springer; 2016.
2. Ting J., Rositch A.F., Taylor S.M. et al. Worldwide incidence of cervical lesions: a systematic review. Epidemiol Infect. 2015;143(2):225–241. DOI: 10.1017/S0950268814001356.
3. Sawaya G.F., Smith-McCune K. Cervical Cancer Screening. Obstet Gynecol. 2016;127(3):459–467. DOI: 10.1097/AOG.0000000000001136.
4. Söderlund-Strand A., Kjellberg L., Dillner J. Human papillomavirus type-specific persistence and recurrence after treatment for cervical dysplasia. J Med Virol. 2014;86(4):634–641. DOI: 10.1002/jmv.23806.
5. Вербицкая Е.А., Урманчеева А.Ф., Артемьева А.С., Михетько А.А. Беременность, ассоциированная с неинвазивным раком шейки матки. Прогноз для матерей и детей. Опухоли женской репродуктивной системы. 2018;14(3):71–76. [Verbitskaya E.A., Urmancheeva A.F., Artemyeva A.S., Mihetko A.A. Pregnancy associated in non-invasive cervical cancer. Forecast for mothers and children. Opukholi zhenskoy reproduktivnoy sistemy. 2018;14(3):71–76 (in Russ.)].
6. Amant F., Halaska M.J., Fumagalli M. et al. Gynecologic cancers in pregnancy: guideline of a Second International Consensus Meeting. Int J Gynecol Cancer. 2014;24(3):394–403. DOI: 10.1097/IGC.0000000000000062.
7. Origoni M., Salvatore S., Perino A. et al. Cervical Intraepithelial Neoplasia (CIN) in pregnancy: the state of the art. Rev Med Pharmacol Sci. 2014;18(6):851–860. PMID: 24706310.
8. Xia T., Gao Y., Wu B., Yang Y. Clinical analysis of twenty cases of cervical cancer associated with pregnancy. J Cancer Res Clin Oncol. 2015;141(9):1633–1637. DOI: 10.1007/s00432-014-1886-x.
9. Fader A.N., Alward E.K., Niederhauser A. et al. Cervical dysplasia in pregnancy: a multi-institutional evaluation. Am J Obstet Gynecol. 2010;203(2):113.e1–113.e16. DOI: 10.1016/j.ajog.2010.04.016.
10. Henes M., Neis F., Rall K. et al. Abnormal cytology during pregnancy — a retrospective analysis of patients in a dysplasia clinic. Anticancer Res. 2013;33(2):711–715. PMID: 23393372.
11. Zagouri F., Dimitrakakis C., Marinopoulos S. et al. Cancer in pregnancy: disentangling treatment modalities. ESMO Open. 2016;1(3):e000016. DOI: 10.1136/esmoopen-2015-000016.
12. Woodland D.L. Facets of Innate Immunity to Viral Infection. Viral Immunol. 2018;31(9):595. DOI: 10.1089/vim.2018.29032.dlw.
13. Hopcraft S.E., Damania B. Tumour viruses and innate immunity. Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 2017;372(1732).pii:20160267. DOI: 10.1098/rstb.2016.0267.
14. Kawai T., Akira S. The role of pattern-recognition receptors in innate immunity: update on Toll-like receptors. Nat. Immunol. 2010;11:373–384. DOI: 10.1038/ni.1863.
15. Доброхотова Ю.Э., Ганковская Л.В., Боровкова Е.И. и др. Совершенствование тактики ведения беременных с дисплазией шейки матки путем коррекции показателей врожденного иммунитета. Акушерство и гинекология. 2018;12:42–49. [Dobrokhotova Yu.E., Gankovskaya L.V., Borovkova E.I. et al. Improving the management of pregnant women with cervical dysplasia by correcting the indicators of innate immunity. Obstetrics and gynecology. 2018;12:42–49 (in Russ.)].



Предыдущая статья
Следующая статья